Diagnóstico por laboratorio
El diagnóstico de la esporotricosis combina hallazgos clínicos, información epidemiológica y resultados de
laboratorio. La anamnesis parte de un examen físico y recopilación de información sobre antecedentes del
paciente con el fin de determinar si se presentó alguna lesión que sugiera una posible esporotricosis. Para el
diagnóstico por el laboratorio se procede a tomar muestras de las lesiones. Si las lesiones nodulares están
abiertas y drenan material sanguinopurulento o corresponden a lesiones ulceradas, la muestra puede ser obtenida
en el laboratorio. Cuando las lesiones son cerradas corresponderá al médico obtener el material de los nódulos
por aspiración con jeringa estéril o tejido por biopsia. Cuando forma clínica involucra otros órganos o tejidos,
la muestra corresponderá al compromiso que presente el paciente, es decir, si el compromiso es en pulmón la
muestra ideal sería el esputo o el lavado broncoalveolar y si es en sistema nervioso central sería el líquido
cefalorraquídeo.
● Examen directo e histopatología (microscopía)
El examen microscópico con KOH al 10% o Hidróxido de sodio (NaOH) al 4% para detectar células parasíticas tipo
levaduras en forma de cigarro. Estas células fúngicas son pequeñas (2-6 µm) de diámetro, raras y difíciles de
detectar durante el examen directo de las muestras obtenidas de pacientes humanos o de perros debido a la
escasez de células fúngicas. Cuando esta prueba se realiza en biopsias de piel recolectadas de gatos infectados
con Sporothrix spp.
Las células de levadura se observan fácilmente, porque los gatos tienen una alta
carga fúngica en sus lesiones. En las biopsias de tejido teñidas con hematoxilina eosina y PAS podría observarse
el cuerpo asteroides, correspondiente a una blastoconidia del hongo rodeada de complejos antígeno-anticuerpos
(conocido como fenómeno de splendore-hoeppli), no obstante, esta estructura solo se reporta en menos el 5% de
las biopsias.
● Cultivo
El cultivo es la prueba estándar de oro para el diagnóstico de la
esporotricosis debido a que permite el aislamiento e identificación
de agente. Las muestras deben ser sembradas en micosel y sabouraud
suplementado con antibióticos, incubadas entre 25-28 °C hasta por un
mes en ambiente de oscuridad. Las colonias de Sporothrix spp. son
muy diversas, algunas con apariencia correosa, superficie plegada y
colores mezclados entre crema, café claro y oscuro, otros presentan
micelio corto dando a las colonias apariencia aterciopelada,
mientras que algunas pueden quedarse completamente blancas o
totalmente oscuras. Debido a la diversidad de aspectos y texturas,
las características macromorfológicas de las colonias no son de
utilidad para identificar los agentes. La preparación para observar
las estructuras microscópicas desde las colonias permite confirmar
el género, pero no la especie. La producción de hifas septadas
hialinas microconidias formando la típica esporulación en margarita
y las macroconidias rectangulares sugieren que el cultivo es de
Sporothrix sp., sin embargo, para confirmar esta identificación se
sugiere demostrar el dimorfismo del hongo haciendo una resiembra de
la colonia en agar BHI o PDA para incubarlo a 35-37 °C esperando
observan la transición a la fase de levadura. Para identificar la
especie involucrada en el cuadro clínico deben realizarse una serie
de pruebas bioquímicas o fisiológicas, lo cual hace costoso y
demorado el diagnóstico, razón por la cual no se realizan de rutina
y el informe de cultivo se limita a indicar que se obtuvo
crecimiento de una especie del complejo Sporothrix schenckii.
● Inmunodiagnóstico
Las técnicas serológicas suelen ser más simples que el cultivo y muy útiles en el diagnóstico y seguimiento de
los pacientes con esporotricosis. Se puede emplear para el diagnóstico y el seguimiento de la evolución de la
enfermedad pruebas serológicas tales como la inmunodifusión en gel de agar, aglutinación de látex en placa y en
tubo, fijación de complemento, inmunofluorescencia y ensayos inmunoenzimáticos – ELISA, no obstante, estas
pruebas de inmunodiagnóstico no están disponibles en Colombia.
● Pruebas moleculares
Se han diseñado técnicas de PCR para facilitar el proceso de identificación a nivel de especie seguidas por un
proceso de secuenicación del fragmento amplificado, las cuales muestran una buena sensibilidad, especificidad y
rapidez para el diagnóstico oportuno de la infección por Sporothrix spp. en muestras clínicas y para
realizar una identificación precisa de las especies del complejo S. schenckii; lo anterior es esencial ya
que la identificación basada únicamente en las características fenotípicas, a menudo no es concluyente debido a
la variabilidad fenotípica dentro de la especie.
De igual forma en algunos países está disponible la prueba cutánea o esporotriquina, en la cual un extracto del
hongo es inyectado intradérmicamente en el antebrazo del paciente y tras 48 horas, se evalúa la aparición de una
zona de induración. Un resultado positivo no indica infección o enfermedad, pero si la exposición pasada al
hongo.
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